ⅠNaigéad úicléachiréamhrá
Tá aigéad núicléach roinnte ina aigéad déocsairbonúicléach (DNA) agus aigéad ribonúicléach (RNA), ina measc roinntear RNA ina RNA ribosómach (rRNA), RNA teachtaire (mRNA) agus RNA aistrithe (tRNA) de réir a fheidhmeanna éagsúla.Tá DNA comhchruinnithe go príomha sa núicléas, mitochondria agus clóraform, agus déantar RNA a dháileadh go príomha sa chíteaplasma.Mar bhunús ábhartha de léiriú géine, tá ról thar a bheith tábhachtach ag eastóscadh aigéid núicléacha i dtaighde bitheolaíocht mhóilíneach agus diagnóis mhóilíneach chliniciúil.Cuirfidh tiúchan agus íonacht eastóscadh aigéad núicléach isteach go díreach ar an PCR ina dhiaidh sin, seicheamhú, tógáil veicteoir, díleá einsímí agus turgnaimh eile.
Ⅱ Modh eastósctha agus íonú aigéid núicléigh
① Modh eastósctha feanól/clóraform
Is modh clasaiceach d'eastóscadh DNA é eastóscadh feanól/clóraform, a úsáideann go príomha dhá thuaslagóir orgánacha éagsúla chun na samplaí a chóireáil, aigéad núicléach DNA-bhunaithe a thuaslagadh sa chéim uisce, lipidí sa chéim orgánach, agus próitéiní idir an dá chéim.Tá na buntáistí a bhaineann le costas íseal, íonachta ard agus dea-éifeacht ag an modh seo.Is iad na míbhuntáistí oibríocht casta agus am ar fad.
② modh Trizol
Is modh clasaiceach é modh Trizol le haghaidh eastóscadh RNA.Tá an modh Trizol roinnte ina chéim uiscí agus céim orgánach tar éis lártheifneoiriú le clóraform, ina bhfuil an RNA tuaslagtha sa chéim uiscí, aistrítear an chéim uiscí chuig feadán EP nua, faightear deascadh tar éis isopropanol a chur leis, agus ansin íonú eatánól.Tá an modh seo oiriúnach le haghaidh eastóscadh RNA ó fhíocháin ainmhithe, cealla agus baictéir.
③ Modh íonú colún lártheifeacha
Is féidir le modh íonú colún lártheifneoir DNA a asú go sonrach trí ábhair asaithe maitrís sileacain speisialta, agus is féidir le RNA agus próitéin pas a fháil go réidh, agus ansin úsáid a bhaint as ard-salann PH íseal chun aigéad núicléach a chomhcheangal, salann íseal luach ard PH elution chun aigéad núicléach a scaradh agus a íonú.Is iad na buntáistí ná tiúchan ard íonú, ardchobhsaíocht, gan gá le tuaslagóir orgánach, agus ar chostas íseal.Is é an míbhuntáiste gur gá é a lártheifneoiriú céim ar chéim, níos mó céimeanna oibríochta.
④ modh coirníní maighnéadacha
Is é modh na coirníní maighnéadacha ná an sampla fíocháin cille a roinnt tríd an lysate, an t-aigéad núicléach a scaoileadh sa sampla, agus ansin na móilíní aigéid núicléacha a adsorbed go sonrach ar dhromchla an choirnín maighnéadach, agus fágtar neamhíonachtaí cosúil le próitéiní agus siúcraí i. an leacht.Trí na céimeanna a bhaineann le scoilteadh fíocháin cille, ceangailteach coirníní maighnéadacha le haigéad núicléach, níocháin aigéid núicléasaigh, elution aigéad núicléach, etc., faightear aigéad núicléach íon ar deireadh.Is iad na buntáistí ná oibriú simplí agus úsáid ghearr ama, gan gá le lártheifneoiriú céim.Tá ceanglais theicniúla íseal aige agus féadann sé oibriú uathoibríoch agus mais a bhaint amach.Déanann an meascán sonrach de choirnín maighnéadach agus aigéad núicléach an t-aigéad núicléach a bhaintear le tiúchan ard agus íonacht.Is é an míbhuntáiste go bhfuil an praghas margaidh reatha sách daor.
⑤ Modhanna eile
Chomh maith leis na ceithre mhodh thuasluaite, tá scoilteadh fiuchphointe, modh salann tiubhaithe, modh glantach anionic, modh ultrasonaic agus modh einsímeach, etc.
Ⅲ Cineál eastóscadh aigéid núicléacha
Tá an t-ardán Direct PCR is mó ar domhan ag Foregene, ardán leithlisithe RNA dhá cholún (DNA-amháin + RNA amháin).Áirítear ar na príomh-táirgí DNA / trealamh aonrú RNA, PCR agus imoibrithe PCR Díreach sraith imoibrithe saotharlainne mhóilíneach.
① eastóscadh RNA iomlán
I measc na samplaí eastóscadh RNA iomlán tá fuil, cealla, fíocháin ainmhithe, plandaí, víris, srl. clónáil mhóilíneach, Dot Blot agus turgnaimh eile.
Foregene a bhaineannFeisteáin Leithlisithe RNA
Trealamh Leithlisithe RNA Iomlán Ainmhithe--Baintear RNA iomlán ard-íonachta agus ardchaighdeáin go tapa agus go héifeachtach ó fhíocháin ainmhithe éagsúla.
Kit Iomlán Leithlisiú RNA Cille--Is féidir RNA iomlán ard-íonaithe agus ardchaighdeáin a fháil ó chealla saothraithe éagsúla i 11 nóiméad.
Gléasra Trealamh Leithlisithe RNA Iomlán--Bain go tapa RNA iomlán ardchaighdeáin ó shamplaí plandaí le hábhar íseal polaisiúicríde agus polyphenol.
Kit Leithlisiú RNA víreasach-- Déan RNA víreasach a leithlisiú agus a íonú go tapa ó shamplaí cosúil le plasma, séiream, sreabháin choirp saor ó chill agus súithíní saothraithe cille.
② eastóscadh DNA genomic
I measc samplaí eastóscadh DNA genomic tá ithir, feces, fuil, cealla, fíocháin ainmhithe, plandaí, víris, etc.Is féidir eastóscadh DNA genomic a úsáid i díleá einsímí, tógáil leabharlann DNA, PCR, ullmhú antasubstainte, anailís hibridiú blot an Iarthair, sliseanna géine, ard. -tréchur seicheamhú agus turgnaimh eile.
Foregene a bhaineannTrealamh Aonrú DNA
Trealamh Leithlisithe DNA Fíocháin Ainmhithe--Eascadh tapa agus íonú DNA genomic ó fhoinsí iolracha, amhail fíocháin ainmhithe, cealla, etc.
Kit Midi DNA fola (1-5ml)-- Glan DNA géanóm ardcháilíochta go tapa ó fhuil fhrith-théachtach (1-5ml).
Kit Aonrú DNA de Chárta Buccal Swab/Cárta FTA-- Glan go tapa DNA géanóm ard-chaighdeán ó swab buccal / samplaí Cárta FTA.
Trealamh Aonrú DNA Plandaí-- Déan DNA géanómach ardcháilíochta a íonú go tapa agus a fháil ó shamplaí plandaí (lena n-áirítear polaisiúicrídí agus samplaí plandaí polaphenóil)
③ eastóscadh plasma
Is cineál de DNA móilín beag ciorclach é Plasmid i gcealla, atá ina iompróir coitianta le haghaidh athcheangail DNA.Is é an modh eastóscadh plasmid ná RNA a bhaint, plasmid a scaradh ó DNA genomic baictéarach, agus próitéin agus neamhíonachtaí eile a bhaint chun plasmid réasúnta íon a fháil.
Kit Mini Plasmid Ginearálta-- Déan DNA plasmid ardchaighdeáin a íonú go tapa ó bhaictéir chlaochlaithe le haghaidh gnáth thurgnaimh bhitheolaíocht mhóilíneach amhail claochlú agus díleá einsímí
④ Cineálacha eastóscadh eile, eastóscadh miRNA, etc.
Trealamh Leithlisithe miRNA ainmhithe-- Baintear blúirí beaga RNA de 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA go tapa agus go héifeachtach as fíocháin agus cealla ainmhithe éagsúla
Ⅳ Ceanglais maidir le heastóscadh agus íonú aigéid núicléighs
① Chun sláine struchtúr príomhúil an aigéid núicléigh a chinntiú.
② Cur isteach próitéiní, siúcraí, lipidí agus macramóilíní eile a laghdú
③ Níor cheart go mbeadh aon tuaslagóir orgánach nó tiúchan ard d'ian miotail ann a d'fhéadfadh bac a chur ar an einsím i samplaí aigéid núicléigh.
Ba cheart ④ RNA agus éilliú aigéad núicléach eile a dhíchur nuair a bhaintear DNA, agus vice versa.
Am postála: Nov-24-2022
